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激光共聚焦顯微鏡與熒光顯微鏡的差別有哪些

提供 來源:      日期:2019年08月27日
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傳統的熒光顯微鏡使用熒光物質來標記細胞中的特定結構,不僅增強了圖像與背景之間的對比度,而且因為許多熒光顯微鏡源使用短波紫外光。當觀察到的熒光標本稍厚時,傳統的熒光顯微鏡難以克服。

 

 

焦平面外的熒光結構模糊而微弱。原因是大多數生物標本是分層重疊的結構(例如耳蝸基底膜。它實際上是由外毛細胞,各種支持細胞,神經纖維等組成的空間結構),并且焦平面在普通光下變化顯微鏡。會顯示不同的形式。

 

如果熒光標記的結構以不同的水平分布并重疊,則落射熒光顯微鏡不僅收集來自焦平面的光,而且來自焦平面上方或下方的散射熒光被物鏡接收顯微鏡的光學分辨率大大降低。

 

激光共聚焦顯微鏡使用激光作為光源,使用共軛聚焦原理和裝置,并使用計算機對觀察對象進行數字圖像處理觀察,分析和輸出。其特征在于通過斷層掃描對樣本進行掃描和成像,用于非侵入性觀察和分析細胞的三維結構。

 

同時,利用免疫熒光標記和離子熒光標記探針,該技術不僅可以觀察固定細胞,組織切片,還可以實時動態觀察和檢測亞細胞水平的活細胞結構,分子,離子和生命活動。觀察如Ca2 +,pH。

 

膜電位和細胞形態等生理信號的變化已成為形態學,分子細胞生物學,神經科學,藥理學,遺傳學等領域新一代強大的研究工具,極大地豐富了人們對細胞生命現象的認識。 

 

激光共聚焦顯微鏡是一套以激光為光源的觀察,分析和輸出系統,在傳統光學顯微鏡的基礎上采用共軛聚焦原理和裝置,并利用計算機對觀察進行數字圖像處理賓語。

 

主要系統包括激光源,自動顯微鏡,掃描模塊(包括共焦光學通道和針孔,掃描鏡,探測器),數字信號處理器,計算機和圖像輸出設備(顯示器,彩色打印機)。

 

可以通過激光共聚焦顯微鏡掃描并成像掃描的樣品。因此,可以在沒有損壞的情況下觀察和分析細胞的三維結構。

 

同時,激光共聚焦顯微鏡也是動態觀察活細胞,多重免疫熒光標記和離子熒光標記的有力工具。準確分析光譜的性質,區分具有高度重疊發射光譜的不同標記信號。

 

最重要的是,對于多色熒光染色,它完全消除了熒光串擾的影響,同時最大限度地減少了樣品熒光的損失。普通光鏡不可能實現這些功能。

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